原位雜交儀良好的溫度控制功能，確保FISH操作更具穩(wěn)定性

熒光原位雜交技術(shù)是一種應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示核酸序列位置的方法。該技術(shù)問世與70年代中期左右，其曾多于與染色體異常的研究，近年來隨著FISH探針種類的不斷增多，使得該技術(shù)逐步應(yīng)用于各種領(lǐng)域。該技術(shù)具有快速，安全，靈敏度高以及探針可長期保存等特點，目前已廣泛應(yīng)用于細胞遺傳學，腫瘤生物學，基因定位，基因作圖，基因擴增及分子診斷等領(lǐng)域。

FISH，熒光原位雜交。目前廣泛應(yīng)用于：

（一）基因（或DNA片段）染色體定位和基因圖譜繪制

（二）發(fā)現(xiàn)染色體數(shù)目與結(jié)構(gòu)異常，廣泛應(yīng)用于快速產(chǎn)前診斷

（三）血液腫瘤學

（四）實體腫瘤學

對于FISH操作來說，那些因素比較重要？

在FISH中很重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率；光照影響了熒光染料的強度，因此探針要避光保存，其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬滅劑封片且避光保存；各種試劑pH也要達到要求，這也直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。

如何確保FISH操作中的溫度？

較佳的措施是使用一些FISH的專用儀器進行操作，比如佰泉的原位雜交儀。如果是手工操作，首先要對FISH操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控能力的檢查，如水浴鍋、孵箱，對其中不符合要求的要進行更換（疾病診斷中的探針要求溫控精度在0.5度以內(nèi)）。其次，要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上，對于在冬季進行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預(yù)熱以達到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。同時檢測的樣本盡量不能超過4塊。操作中的行動一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度，諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季，蓋玻片本身溫度就低，加之探針的量本就不多（10ul），因此事先沒有預(yù)熱的蓋玻片會使得雜交液的溫度急劇下降嚴重地影響了探針和目標DNA的雜交效率。因此對上述小部件的要進行預(yù)熱處理，不然會影響FISH的雜交效果。

FISH 技術(shù)作為連接分子生物學與細胞生物學的橋梁地位已為世人所公認。盡管目前FISH技術(shù)無法達到完全的雜交，特別是在應(yīng)用較短cDNA探針時存在雜交效率明顯下降的問題，但隨著各種新型分子探針以及精度更高的光學顯微鏡和功能強大的計算機分析系統(tǒng)的不斷問世，上述問題將會逐步得到解決，該技術(shù)的作用正變得日益重要，應(yīng)用領(lǐng)域也得以不斷擴展。FISH技術(shù)在泌尿系統(tǒng)腫瘤研究領(lǐng)域的巨大潛力與光明前景將帶領(lǐng)我們進入全新時代。