原位雜交儀中的SPR親和力測定服務(wù)

表面等離子體共振 (SPR)親和力測定是一種基于光學(xué)的無標(biāo)記檢測技術(shù)，用于實時檢測兩個或多個分子之間的分子互作。SPR親和力測定具有高通量、高靈活性、高靈敏度的特點，可以用于早期的藥物研發(fā)以及臨床前藥物篩選。比如：篩選小分子藥物或多肽（酶或抗體等）具有強大的優(yōu)勢能夠快速、精準(zhǔn)地篩選出候選藥物分子為后續(xù)研究節(jié)省成本。

佰泉生物基于Biacore平臺為客戶提供準(zhǔn)確、快速的親和力測定服務(wù)。表面等離子體共振 (SPR)親和力測定是一種基于光學(xué)的無標(biāo)記檢測技術(shù)，用于實時檢測兩個或多個分子之間的分子互作。SPR親和力測定的平臺吞吐量、靈活性和靈敏度使研究人員有可能在任何結(jié)合中研究，包括：抗原抗體親和力檢測，蛋白與小分子多肽親和力檢測，蛋白與小分子藥物的親和力檢測等?？梢匝芯糠秶鷱V泛的分子，從離子、片段和小分子到蛋白質(zhì)和病毒。佰泉生物的原位雜交儀技術(shù)專家基于SPR親和力測定技術(shù)，在項目開始前為客戶提供精準(zhǔn)、有效的技術(shù)咨詢服務(wù)，為客戶提供1-2周的快速親和力檢測周期，為客戶提供好的、有效的親和力測定數(shù)據(jù)，為客戶的實驗項目提供強有力的保障。

SPR親和力檢測是一種通過傳感器芯片跟蹤信號變化來檢測分子相互作用的方法。SPR信號通過折射率變化呈現(xiàn)，它指的是響應(yīng)單位 (RU) 大約相當(dāng)于1pg/mm2的蛋白質(zhì)表面濃度。在兩個分子之間的相互作用過程中，隨時間繪制SPR信號會產(chǎn)生傳感圖，該圖可以實時可視（圖 1）。一般結(jié)合反應(yīng)包括三個階段：結(jié)合、平衡和解離；將這些傳感圖數(shù)據(jù)與數(shù)學(xué)模型擬合，科學(xué)家們可以計算關(guān)聯(lián) (Ka) 和解離 (Kd) 速率常數(shù)，并確定結(jié)合親和力(KD)。與基于平衡點測量抗體結(jié)合親和力的等溫量熱法 (ITC) 不同，SPR可以獲得完整的動力學(xué)參數(shù)來評估結(jié)合和解離的所有影響以及抗體親和力。

在抗體親和力測量中，待分析的抗體首先被固定在傳感器芯片表面的高親和力抗IgG 抗體捕獲。然后將一系列濃度的抗原依次注射到整個表面。根據(jù)傳感圖曲線，人們可以根據(jù)動力學(xué)參數(shù)對抗體進(jìn)行排序，并選擇具有特性的單克隆抗體。與緊密結(jié)合抗體的發(fā)現(xiàn)相比，特定區(qū)域（表位）的鑒定在藥物發(fā)現(xiàn)中更有前景，因為通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白工程方法可以使結(jié)合親和力成熟。因此，基于涉及兩種結(jié)合反應(yīng)的二價分析物模型，我們能夠提供分析來鑒定與兩種不同抗原表位結(jié)合的抗體。首先將通用抗體（如兔抗小鼠免疫球蛋白）共價連接到芯片表面，然后抗體被先前連接的通用抗體捕獲。不飽和位點被封閉后，注射的抗原將與抗體結(jié)合，形成Ab-Ag復(fù)合物。隨后施用于評估結(jié)合親和力的第二單克隆抗體，如果第二抗體結(jié)合不同的單獨表位，將觀察到特有的傳感圖曲線。

應(yīng)用范圍：

我們提供通過SPR分析研究的生物分子相互作用的熒光原位雜交儀服務(wù)。

通過SPR研究各種生物實體，包括小分子 (<100 Da)、蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)、細(xì)菌、病毒和全細(xì)胞。大多數(shù)已發(fā)表的SPR研究涉及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，其中抗體-抗原相互作用代表了一個主要方向。我們提供高靈敏度的儀器和實驗方案，幫助客戶進(jìn)行小分子、脂質(zhì)和核酸的研究。蛋白質(zhì)與較大實體（如全細(xì)胞和一些細(xì)菌和病毒）的相互作用受到漸逝波指數(shù)衰減的限制。在實踐中，可以有效地研究這些大分子，但獲得的信息可能僅限于定性或半定量（例如，相對排序）數(shù)據(jù)。